ΠΡΟΕΜΦΥΤΕΥΤΙΚΟΣ ΓΕΝΕΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ - ΒΙΟΨΙΑ ΣΤΟ ΣΤΑΔΙΟ ΤΗΣ ΑΥΛΑΚΩΣΗΣ

ΑΥΛΑΚΩΣΗ : ΣΕΙΡΑ ΔΙΑΔΟΧΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΙΚΩΝ ΔΙΑΙΡΕΣΕΩΝ ΓΟΝΙΜΟΠΟΙΗΜΕΝΟΥ ΩΑΡΙΟΥ. Κατά την αυλάκωση : Το γονιμοποιημένο ωάριο δεν αυξάνει σε μέγεθος. Το γενικό σχήμα εμβρύου δεν αλλάζει. Δεν αλλάζουν θέση τα οργανίδια του κυτταροπλάσματος. Είναι περιορισμένες οι ποιοτικές αλλαγές στη χημική σύνθεση του ωαρίου. Τα κύτταρα που προκύπτουν μετά από κάθε διαίρεση ονομάζονται ΒΛΑΣΤΟΜΕΡΙΔΙΑ.

ΧΡΗΣΗ ΒΛΑΣΤΟΜΕΡΙΔΙΟΥ ΣΤΟΝ ΠΡΟΕΜΦΥΤΕΥΤΙΚΟ ΓΕΝΕΤΙΚΟ ΕΛΕΓΧΟ.

• Η μέθοδος του πολικού σωματίου δεν καταλήγει πάντα στην επιδιωκόμενη διάγνωση.
• Η αφαίρεση 1-3 βλαστομεριδίων για βιοψία δε μειώνει σημαντικά την ικανότητα των εμβρύων να εμφυτευτούν.
• Δίνει τη δυνατότητα διάγνωσης ασθενειών όπως : Lesch-Nychan, Μυϊκή δυστροφία Duchenne, κυστική ίνωση κλπ.
• Η βιοψία σε πρώιμο στάδιο αυλάκωσης ή στο στάδιο βλαστοκύστης μπορεί να είναι επιβλαβής για την περαιτέρω ανάπτυξη του εμβρύου.

ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΠΡΑΓΜΑΤΟΠΟΙΗΣΗΣ ΒΙΟΨΙΑΣ ΕΜΒΡΥΟΥ ΣΤΟ ΣΤΑΔΙΟ ΤΗΣ ΑΥΛΑΚΩΣΗΣ

• ΑΝΑΡΡΟΦΗΣΗ
• ΕΞΑΓΩΓΗ
• ΜΗΧΑΝΙΚΗ ΔΙΑΙΡΕΣΗ

ΑΝΑΡΡΟΦΗΣΗ

Τα βλαστομερίδια απομακρύνονται με τη βοήθεια μικροπιπέττας. Η μικροπιπέττα είτε διαπερνά τη διαφανή ζώνη. ή έρχεται σε απευθείας επαφή με το βλαστομερίδιο μέσω οπής που ανοίγεται στη διαφανή ζώνη με όξινο Τyrode’s διάλυμα.

ΕΞΑΓΩΓΗ

Η εξαγωγή πραγματοποιείται με 3 τρόπους : Α) με ΜΕΤΑΤΟΠΙΣΗ : δημιουργείται άνοιγμα στη διαφανή ζώνη με λοξή πιπέττα.μια 2η πιπέττα εισάγεται σε άλλο σημείο. Το βλαστομερίδιο εξέρχεται από την 1η οπή. Β) με ΠΑΛΙΝΔΡΟΜΙΚΕΣ κινήσεις : μια οπή διανοίγεται στη διαφανή ζώνη με όξινο Tyrode’s διάλυμα. Το βλαστομερίδιο εξέρχεται με τη βοήθεια μικροβελόνας. Γ) με ΣΠΡΩΞΙΜΟ : Ανοίγεται οπή στη διαφανή ζώνη με όξινο Tyrode’s διάλυμα. Τα βλαστομερίδια εξέρχονται με άσκηση πίεσης στη διαφανή ζώνη σε κάποια απόσταση από την οπή.

ΣΥΓΚΡΙΣΗ ΜΕΘΟΔΩΝ ΑΝΑΡΡΟΦΗΣΗΣ ΜΕ 2 ΚΑΙ 3 ΠΙΠΕΤΤΕΣ

• 3 ΠΙΠΕΤΤΕΣ : Η 1η συγκρατεί το έμβρυο, η 2η τρυπά τη διάφανη ζώνη και η 3η αναρροφά το βλαστομερίδιο. Το έμβρυο τοποθετείται στην 9η ώρα με την πιπέττα συγκράτησης και το βλαστομερίδιο στην 3η ώρα. Τρυπάται η διάφανη ζώνη με ρίψη όξινου διαλύματος,δημιουργείται οπή 40 μm και εισάγεται η 3η πιπέττα που αναρροφά το βλαστομερίδιο.
• 2 ΠΙΠΕΤΤΕΣ : Η ίδια πιπέττα που τρυπά τη διάφανη ζώνη,αναρροφά και το βλαστομερίδιο.

• Η ικανότητα ανάπτυξης στο στάδιο της βλαστοκυστης είναι ίδια και για τις δυο μεθόδους.
• Ο χρόνος που απαιτείται για την «2 -πιπεττες» είναι μικρότερος από την «3-πιπεττες»
• Αφού ο χρόνος είναι μικρότερος μειώνεται η έκθεση του εμβρύου σε όξινες συνθήκες που ίσως έχει αρνητικές επιπτώσεις στην ανάπτυξη του.

ΠΛΕΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ ΤΕΧΝΙΚΗΣ ΜΕΤΑΤΟΠΙΣΗΣ ΣΕ ΣΧΕΣΗ ΜΕ ΑΝΑΡΡΟΦΗΣΗ

• Πιο απλή η προετοιμασία των πιπεττών.
• Πιο μικρός ο χρόνος βιοψίας.
• Σημαντικά πιο υψηλός ο αριθμός βλαστομεριδίων που παραμένουν βιώσιμα μετά τη βιοψία.
• Πιο καλή η κατάσταση των βλαστομεριδίων που λαμβάνονται άρα…
• Πιο έγκυρα τα αποτελέσματα των τεχνικών ανάλυσης.

ΚΑΤΑΛΛΗΛΟΤΕΡΟ ΣΤΑΔΙΟ ΒΙΟΨΙΑΣ ΕΜΒΡΥΟΥ

Θεωρείται αυτό των 8 κύτταρων διότι : 1) η βιοψία σε αρχικό στάδιο αυλάκωσης μειώνει σημαντικά τη μάζα του εμβρύου. 2) η βιοψία στο στάδιο της βλαστοκύστης με αφαίρεση κύτταρων από το τροφοεκτόδερμα μπορεί να καταστρέψει τα εναπομείναντα κύτταρα του τροφοεκτοδέρματος και να επηρεάσει την ανάπτυξη του εμβρύου.

Η ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΑΝΘΡΩΠΙΝΩΝ ΕΜΒΡΥΩΝ ΔΕΝ ΕΠΗΡΕΑΖΕΤΑΙ ΑΠΟ ΒΙΟΨΙΑ ΣΤΟ ΣΤΑΔΙΟ 8 ΚΥΤΤΑΡΩΝ

• Το ποσοστό των εμβρύων που αναπτύχθηκαν στο στάδιο της βλαστοκύστης παρόμοιο για ομάδα έλεγχου και για τα έμβρυα που είχαν υποστεί βιοψία.
• Η πρόσληψη πυροσταφυλικού στα έμβρυα που υπέστησαν βιοψία ήταν μικρότερη από ότι στα έμβρυα έλεγχου αλλά ακολουθούσε παρόμοια πορεία.
• Ο ολικός αριθμός κύτταρων στη βλαστοκύστη χαμηλότερος στα 6/8 και 7/8 έμβρυα μετά τη βιοψία αλλά μόνο σε ποσοστό ανάλογο της ελάττωσης κυτταρικής μάζας.
• Η αναλογία κύτταρων τροφοεκτοδέρματος και εσωτερικής κυτταρικής μάζας στο στάδιο βλαστοκύστης δεν αλλάζει.

ΜΕΘΟΔΟΙ ΕΚΤΙΜΗΣΗΣ ΚΑΤΑΛΛΗΛΟΤΗΤΑΣ ΕΜΒΡΥΟΥ ΓΙΑ ΕΜΦΥΤΕΥΣΗ

• Μορφολογικός έλεγχος
• Μέτρηση μεταβολικών παραμέτρων πχ. πρόσληψη πυροσταφυλικού οξέος,κατανάλωση οξυγόνου κλπ.
• Ικανότητα εμβρύου να φτάσει στο στάδιο της βλαστοκύστης.

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Έρευνες έδειξαν ότι υπάρχει στατιστικά σημαντική διάφορα ανάμεσα στην ανάπτυξη βλαστομεριδίων που προέρχονται από έμβρυα που έχουν φτάσει στο στάδιο της βλαστοκυστης και από έμβρυα που δεν έχουν φτάσει.

Εργασία που παρουσιάστηκε από τη φοιτήτρια Ιατρικής Αθανασίου Μαρία, με ΑΜ 200100006
στα πλαίσια του κατ'επιλογήν μαθήματος της Πειραματικής Εμβρυολογίας
Υπεύθυνη μαθήματος : Ρωξάνη Αγγελοπούλου, Αναπληρώτρια Καθηγήτρια
Εργαστήριο Ιστολογίας και Εμβρυολογίας
Ιατρική Σχολή Πανεπιστημίου Αθηνών
Για περισσότερες πληροφορίες μπορείτε να ανατρέξετε στον ιστότοπο του μαθήματος της Πειραματικής Εμβρυολογίας: http://www.med.uoa.gr/expembr/
Τελευταία αναθεώρηση : 1/5/2006